TRATAMENTO DO CÂNCER COM FREQUÊNCIAS DE CEM MODULADOS COM FREQUÊNCIAS ESPECÍFICAS PARA O TUMOR

Usos diagnósticos e terapêuticos de campos eletromagnéticos

A radiação ionizante de alta energia é frequentemente usada na medicina tanto para o diagnóstico [tomografia computadorizada (TC) quanto para radiogranetos radiativos] e tratamento (radioterapia) da doença. O uso de RF EMF de baixa intensidade na medicina é muito menos comum (Figura 1). Embora subsistam incertezas quanto à eficácia, há evidências crescentes de que algumas formas de exposição ao CTM podem ser benéficas para o diagnóstico e tratamento da doença (Tabela 1).

Figura 1.

Espectro eletromagnético e exposições comuns.

O espectro eletromagnético é representado em azul. As exposições ambientais com consequências negativas conhecidas ou possíveis são mostradas em vermelho. As exposições recebidas como parte do diagnóstico ou tratamento médico são mostradas em verde.

A magnetoencefalografia (MEG) é uma modalidade não invasiva usada para diferenciar entre os tipos de tecido neoplásico no cérebro, com potencial para ser usado em combinação com TC ou ressonância magnética (RM).^[13] Uma modalidade chamada TRIMprob mostrou sensibilidade e especificidade promissoras no diagnóstico de cânceres de próstata e retal, explorando diferenças na ressonância tecidual entre os tecidos neoplásicos e os tecidos normais^. Assim, a otimização das modalidades de diagnóstico de FCE EMF para complementar os métodos de triagem atuais pode levar a uma melhor precisão diagnóstica.

EMF também tem sido utilizado como modalidade terapêutica (Tabela 1). CEM pulsados demonstraram eficácia na osteoartrite^[15]. Campos elétricos alternados têm sido usados para induzir a cicatrização de fraturas, com eficácia sugerida semelhante à do enxerto ósseo^. A ação proposta de CEM pulsado é através da indução da migração dirigida e diferenciação de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea^. Atualmente, a FCE EMF é usada como uma opção terapêutica em casos que vão desde fraturas de estresse tibial até lesão medular.

A ablação por radiofrequência (RFA) é uma opção terapêutica comumente usada para tratar mal-indignidades malignas, incluindo câncer de mama, câncer colorretal e carcinoma hepatocelular (HCC), e especialmente metástases irressecáveis cirurgicamente^[18]. O RFA é administrado com dispositivos médicos que operam entre 460 e 550 kHz e fornecem energia terapêutica aos tecidos moles^. Esta modalidade destrói o tecido tumoral através da necrose induzida pelo calor, elevando sua temperatura para aproximadamente 100oC por aproximadamente 15 min^.

Evidências laboratoriais e clínicas sugerem que certas frequências dentro da faixa de FCE EMF do espectro podem ter efeitos antitumorais sem causar hipertermia em pacientes com câncer de mama, CHC, câncer de ovário, câncer de tireóide ou glioblastoma multiforme^.–[22] A tecnologia NovoTTF-100A aplica campos elétricos alternados por meio de eletrodos colocados nas partes do corpo que afetam o tumor sobre a pele. Este foi o primeiro dispositivo EMF de seu tipo aprovado pela Food and Drug Administration (FDA) dos Estados Unidos com base nos resultados de um estudo de fase III para o tratamento do glioblastoma recorrente mostrando eficácia semelhante ao regime de quimioterapia padrão de cuidados, mas com menos efeitos adversos^.

Campos elétricos pulsados foram desenvolvidos para o tratamento localizado de tumores. Esta abordagem é baseada no uso de pulsos elétricos curtos, induzindo mudanças irreversíveis ou reversíveis na permeabilização da membrana celular. Mudanças irreversíveis levam à morte celular, e as mudanças reversíveis permitem um aumento acentuado da penetração da quimioterapia^[24]. A adição de modalidades terapêuticas baseadas em CME RF com efeitos adversos mínimos é uma perspectiva emocionante para pacientes com câncer.

Uma consideração final com terapias baseadas em FME é possível sinergia com quimioterapias frequentemente usadas. O RF EMF em associação com bevacizumab e ciclofosfamida não demonstrou aumento clínico nos efeitos adversos, e foram notificadas resultados semelhantes quando o CEM foi utilizado em associação com paclitaxel ou cisplatina^[20],,^[22]. Esses achados sugerem que os pacientes podem não apresentar efeitos adversos adicionais de quimioterapia e terapia com FME; além disso, o tratamento simultâneo com ambas as modalidades pode ter um efeito sinérgico.

Racional para o uso terapêutico de radiofrequência modulada por amplitudes campos eletromagnéticos para o tratamento sistêmico do câncer

Identificamos anteriormente várias frequências em pacientes com insônia crônica usando métodos de biofeedback. Demonstramos que a administração intrabuccal de níveis muito baixos e seguros de RF EMF de 27,12 MHz, modulada por amplitude a 42,7 Hz, tem um efeito indutor do sono em indivíduos saudáveis^[25],[26]. No entanto, a administração do mesmo sinal aos pacientes com insônia não produziu nenhum benefício terapêutico. Em contraste, a administração de uma combinação das quatro frequências mais comumente identificadas em pacientes com insônia crônica (2,7 Hz, 21,9 Hz, 42,7 Hz e 48,9 Hz) resultou em melhorias significativas do tempo total de sono e latência do sono, conforme avaliado por avaliação polissonográfica^[27],[28]. Estes primeiros achados sugeriram que uma combinação de várias frequências é necessária para alcançar um efeito terapêutico na insônia crônica.

Em 2001, Barbault et al.^[20] levantaram a hipótese de que o crescimento de tumores humanos pode ser sensível a frequências de modulação específicas. Para testar essa hipótese, eles iniciaram uma pesquisa baseada em pacientes usando novos dispositivos e técnicas de biofeedback, o que levou à descoberta de que pacientes com o mesmo tipo de tumor tinham respostas de biofeedback para as mesmas frequências, independentemente de seu sexo, idade ou status étnico^[20]. As frequências identificadas em pacientes com câncer foram predominantemente encontradas acima de 1.000 Hz. Este intervalo é significativamente mais elevado do que o intervalo dentro do qual as frequências de insônia foram identificadas (300 Hz). Eles também descobriram que, em contraste com o que havia sido observado em pacientes com insônia, as respostas de biofeedback só foram observadas em frequências muito precisas. Isso levou ao desenvolvimento de sintetizadores de frequência altamente precisos para a detecção de frequências específicas do tumor. Curiosamente, a maioria das frequências identificadas em um determinado tipo de tumor só foi encontrada em pacientes com o mesmo tipo de tumor^. Por exemplo, 85% das frequências identificadas em pacientes com CCH foram encontradas apenas em outros pacientes com CHC. Da mesma forma, 75% das frequências identificadas em pacientes com câncer de mama foram encontradas apenas em pacientes com o mesmo tipo de tumor^. Eles também descobriram que um pequeno número de frequências, por exemplo, 1.873.477 Hz, 2.221,23 Hz, 6.33 Hz e 10.456.383 Hz, foram encontrados na maioria das pacientes com câncer de mama, HCC, câncer de próstata e câncer de pâncreas^[20]. O exame de indivíduos saudáveis sem diagnóstico de câncer não revelou nenhuma resposta de biofeedback às frequências identificadas em pacientes com diagnóstico de câncer.

Experiência Clínica com Administração Intrabíaca de Campos Eletromagnéticos de Radiofrequência modulada Amplitude

Depois de ter identificado com sucesso frequências específicas de tumores em 163 pacientes com câncer, Barbault et al.^[20] ofereceram tratamento compassivo a 28 desses pacientes com câncer avançado e opções terapêuticas limitadas. O tratamento foi administrado com um dispositivo portátil construído com o mesmo sintetizador de frequência de alta precisão que o utilizado para a identificação de frequências específicas do tumor. Eles escolheram a frequência portadora de 27,12 MHz, pois é universalmente aprovada para uso médico. O sinal de 27,12 MHz foi modificado por amplitude nas frequências específicas identificadas em pacientes com diagnóstico de câncer. As frequências foram emitidas de forma sequencial, cada uma para 3 s a partir da frequência mais baixa para a mais alta, e o ciclo foi repetido continuamente por 1 h. O tratamento foi administrado 3 vezes ao dia, ou seja, para um total de 3 h até progressão da doença ou morte. A administração intrabuclicaca de CEM RF de 27,12 MHz com o dispositivo TheraBionic resulta em uma absorção corporal inteira de níveis muito baixos de EMF (Figura 2). A taxa de absorção máxima específica do RF aplicado média ao longo de qualquer 10 g de tecido é estimada em menos de 2 W por kg^.

Figura 2.

Entrega de campos eletromagnéticos de radiofrequência intrabucária (RF) (EMF).

O paciente recebe baixos níveis de EMF que são minimamente absorvidos e distribuídos sistemicamente com o corpo agindo como uma antena. Amarelo indica as regiões do corpo que recebem a maior exposição.

Os resultados deste estudo, com data de corte de 1 de abril de 2009, são publicados^[20]. Resumidamente, 1 paciente com câncer de mama em estágio IV comprovado em biópsia metástasia para o fêmur esquerdo e a glândula adrenal direita teve uma resposta completa com duração de 11 meses. Um paciente com câncer de mama em estágio IV comprovado em biópsia metástase para o fígado e o esqueleto teve uma resposta parcial com duração de 13,5 meses. Além disso, 5 pacientes tiveram doença estável por +34,1 meses (câncer de tireóide com metástases pulmonares comprovadas por biópsia), 6,0 meses (mesotelioma metásstase para o abdômen), 5,1 meses (câncer de pulmão de células não pequenas) e 4,1 meses (câncer de pâncreas com metástase hepática comprovada por bipsia). Dois pacientes ainda estavam em tratamento em 1o de abril de 2009. Um paciente com câncer de ovário refratário à cisplatina e taxanos foi submetido a tratamento por 2 anos adicionais por um total de 73 meses. Ela teve progressão da doença e morreu 78 meses após se inscrever no estudo. O paciente com câncer de tireoide em estágio IV metastassestizados nos pulmões permanece em tratamento como 1o de outubro de 2013 (Figura 3), e recebeu tratamento contínuo por um total de 86 meses.

A excelente tolerabilidade e os resultados clínicos promissores do estudo de viabilidade levaram ao delineamento de um estudo de fase I/II iniciado pelo investigador em 41 pacientes com CCM avançado e doença de Child Pugh A ou B. Os resultados do estudo, com data de corte de 9 de junho de 2011, são publicados^[21]. Resumidamente, um efeito antitumor foi documentado em 20 (48,8%) pacientes. Respostas objetivas e/ou sobrevida em longo prazo foram observadas em 8 (19,5%) pacientes. Os níveis de alfa-fetoproteína diminuíram 20% ou mais em 4 (9,8%) doentes após o início da terapêutica. Respostas duráveis foram observadas em vários pacientes com evidência de progressão da doença no momento da inscrição. Em particular, um paciente de 76 anos com CCH metástase nos pulmões e evidência de progressão da doença no momento da inscrição em julho de 2006 teve uma resposta quase completa, que durou mais de 5 anos (Figura 4). Os resultados deste estudo sugerem um grau de eficácia superior ou comparável ao do sorafenib (^{Nexavaro ?}). De fato, em um estudo semelhante de 137 pacientes com doença de Child Pugh A ou B, a taxa de resposta alcançada com sorafenibe foi de 2,2% vs. 9,8% com TheraBionic^[21],[29]. Além disso, todos os pacientes tratados com sorafenib apresentaram evidência de progressão da doença aos 15 meses, enquanto 4 (9,8%) pacientes tratados com TheraBionic não apresentaram evidência de progressão da doença ao mesmo tempo^.,[29] Esses resultados promissores fornecem uma forte justificativa para iniciar um estudo randomizado determinando o impacto do TheraBionic na sobrevida global e no tempo para a progressão sintomática em pacientes com CHC avançado que falharam ou não toleram o sorafenibe. Estudos adicionais são planejados em câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer de ovário e câncer de próstata.

Apenas efeitos adversos menores foram observados nestes dois estudos. Quatro dos 69 (5,8%) pacientes incluídos nesses dois estudos apresentaram sonolência grau 1 após o tratamento e 1 apresentaram mucosite grau 1 (1,4%). Não havia grau 2, 3 ou 4 toxicidades em qualquer paciente, mesmo entre usuários de longo prazo. Não foram observadas alterações no hemograma completo, função renal ou função hepática em qualquer paciente.

Foi observada melhoria clínica no prazo de algumas semanas após o início do tratamento. Duas pacientes com metástases ósseas dolorosas de câncer de mama experimentaram melhora sintomática significativa em 2 semanas^. Da mesma forma, entre 11 pacientes com CHC avançado e dor antes do início do tratamento, 5 relataram desaparecimento completo e 2 relataram alívio significativo da dor dentro de algumas semanas após o início do tratamento^.

Como relatado anteriormente, a descoberta de frequências específicas do tumor consiste na medição de vários parâmetros, incluindo variações na amplitude ^[20]do pulso. Esse fenômeno consistente, mas inexplicável, foi cunhado a resposta de biofeedback. Para investigar melhor a relação entre a resposta ao biofeedback e um diagnóstico específico de câncer, Costa projetou um estudo clínico no qual indivíduos saudáveis, bem como pacientes com hepatite B, HCC ou câncer de mama crônicos são expostos a frequências escolhidas aleatoriamente, frequências específicas do HCC e frequências específicas do câncer de mama (clínica.org O objetivo deste estudo é determinar a sensibilidade, a especificidade e o padrão de resposta de biofeedback nesses quatro grupos distintos de pacientes.

O Mecanismo de Ação

Um grande corpo de pesquisa relata uma ampla gama de efeitos biológicos após a exposição ao RF EMF. Os achados desses estudos podem ser amplamente agrupados em categorias: função e metabolismo celular; desregulação e risco de malignidade; efeitos intercelulares e sistêmicos; morfologia e diferenciação celular; efeitos enzimáticos; efeitos farmacológicos (Figura 5). No geral, os estudos se concentraram em possíveis impactos negativos da exposição a CEM, desde danos no DNA até um possível papel como promotor de câncer. Anteriormente, pouca ênfase foi colocada sobre os possíveis impactos positivos da exposição controlada à EMF; no entanto, esse paradigma começou a mudar.

O cálcio (Ca ²⁺) é crucial para uma série de processos celulares que vão desde padronização embrionária até ativação de fatores de transcrição e apoptose. A modulação EMF de Ca ²⁺ é especialmente atraente porque os pesquisadores geralmente concordam que a maioria dos campos avaliados não é capaz de causar efeitos diretos na estrutura celular ou cromatina. Os primeiros estudos ilustraram o fluxo de Ca ²⁺ no cérebro de gatos sob anestesia local após a exposição ao FME RF modulado por amplitude sinusoidal, fornecendo justificativa para numerosos estudos subsequentes^[30]. Os resultados do estudo foram dependentes de linhas celulares usadas, duração da exposição a CTM, escolha dos níveis de exposição aos CEM e se a exposição foi contínua ou pulsada^.,[32] Um modelo de efluxo Ca ^{2 +} descreveu um fenômeno de “windowing”, semelhante ao descrito anteriormente em cérebros de pintinhos em que o efluxo atinge um máximo em janelas discretas de EMF^{[33], [34]}. Embora os achados específicos e as hipóteses subsequentes difiram, a literatura sugere fortemente que os níveis de exposição a CEM podem afetar o ²⁺fluxo de Ca 2+; no entanto, o significado biológico dessas flutuações permanece incerto e o mecanismo de demodulação que levou a mudanças no fluxo de Ca ²⁺ ainda não foi elucidado^.

Vários estudos relataram a indução mediada por EMF das respostas ao estresse celular através da ativação de proteínas de choque térmico (HSPs)^[35]. Essas descobertas apóiam a teoria de que o EMF ativa uma via comum mediada pelo HSP70 e, mais especificamente, que os CEM podem interagir com sequências específicas de DNA nas regiões promotoras dos genes^[36].

As células usam um conjunto dinâmico de reações redox para manter a homeostase celular e minimizar os danos causados pelos processos oxidativos. Os efeitos induzidos por CEM na resposta celular às espécies reativas de oxigênio (ROS) podem depender do estado antioxidante das células no momento da exposição^. Além disso, evidências in vivo sugerem que a intensidade e a duração da exposição podem afetar a resposta oxidativa celular de maneira dependente da dose^.

Esses dados sugerem uma resposta de estresse oxidativo após alguns programas de exposição à FED e levaram à hipótese de que a exposição a longo prazo a EMF causaria elevação crônica das EROs e subsequente diminuição da melatonina, levando a um risco aumentado de danos e malignidade ^do DNA^. No entanto, não houve indícios de aumento da transformação após a exposição a CEM isoladamente ou em combinação com outros fatores de estresse, sugerindo que o EMF não funcionou em sinergia com outros fatores de estresse para transformar as células^[40].

Estudos que avaliam o impacto do RF EMF na expressão gênica têm sido inconclusivos. Embora alguns estudos não tenham relatado alterações na expressão gênica, outros identificaram níveis reduzidos de quimiocinas pró-inflamatórias^[41],[42]. A modulação da expressão gênica também foi relatada de forma tecidual e tumore específica em células expostas à amplitude de FCE EMF modulada em frequências específicas^[43]. Nota, estudos negativos usaram tecnologia de microarray ou avaliaram genes específicos.

A melatonina mantém os ritmos circadianos naturais do corpo, participa da resposta ao estresse oxidativo e relatou efeitos antitumorais por mecanismos como inibição do ciclo celular, indução da apoptose e prevenção de metástase, especialmente em malignidades dependentes de hormônios^. Modulação de melatonina após exposição a CEM foi também relatada in vivo^[45]. Como a melatonina desempenha um papel na prevenção da metástase, o efeito dos CME na invasão celular foi avaliado em linhagens celulares de câncer de mama, não demonstrando nenhuma mudança no potencial de invasão^. Embora estudos sugiram uma associação entre os níveis de melatonina e a exposição ao CME RF, há discordância em relação ao impacto nos níveis de melatonina, bem como no mecanismo de interação com melatonina e FSE EMF.

Estudos que examinam os danos no DNA após a exposição ao FED foram inconclusivos. Enquanto alguns estudos citaram quebras de cadeia dupla, evidência de dano cromossômico e formação de micronócleos, outros não relataram evidência de dano cromossômico ou genotoxicidade^,,[48]. Embora díspare, a literatura demonstrou que o CEM de baixa energia não causa efeitos previsíveis no DNA.

Para começar a entender o mecanismo molecular que explica as respostas clínicas observadas em pacientes tratados com o dispositivo TheraBionic, projetamos e construímos sistemas para expor linhas celulares ao mesmo sinal de FR que o usado para o tratamento do paciente^[43]. Conduzimos ensaios de proliferação celular de HCC (HepG2 e Huh7) e linhas celulares de câncer de mama (MCF-7), que foram expostas a frequências de modulação específicas do CPS, específicas do câncer de mama ou selecionadas aleatoriamente. As condições de exposição replicaram o regime administrado aos pacientes, ou seja, 3 h por dia, durante 7 dias seguidos. Embora as frequências de modulação selecionadas aleatoriamente não tenham afetado a proliferação de nenhuma linha de células cancerígenas, as frequências de modulação específicas do CHC efetivamente inibiram o crescimento de ambas as linhagens celulares do HCC. Da mesma forma, as frequências de modulação específicas do câncer de mama efetivamente inibiram o crescimento da linha celular do câncer de mama. No entanto, o crescimento das linhagens celulares do CHC não foi inibido por frequências de modulação específicas por câncer de mama, nem o crescimento da linhagem de células de câncer de mama foi inibido por frequências de modulação específicas do CHC. Além disso, o crescimento de hepatócitos normais imortalizados (THLE-2) e células mamárias (MCF-10A) não foi afetado por frequências de modulação específicas do tumor. Esses experimentos forneceram a primeira evidência in vitro de que o efeito antiproliferativo do dispositivo TheraBionic é mediado por uma combinação de frequências de modulação específicas do tumor definidas com precisão. De fato, mais de 50% das frequências de modulação específicas do CHC, específicas do câncer de mama e selecionadas aleatoriamente, diferiram em menos de 1%. Além disso, 7 das frequências específicas do CCP e do câncer de mama eram idênticas^. Em seguida, buscou-se determinar o efeito de resposta à dose da exposição às frequências de modulação tumoral específicas. Enquanto 3 h ou 6 h de exposição diária durante 1 semana resultou em inibição significativa do crescimento de células cancerígenas, 1 h de exposição diária por 1 semana ou 3 horas de exposição diária por 3 dias não inibiu o crescimento de células cancerígenas.

Tendo identificado um efeito inibitório de crescimento reproduzível de frequências específicas do tumor em várias linhagens de células cancerígenas, usamos a tecnologia RNA-seq para examinar de forma abrangente o perfil de expressão gênica das células HepG2 expostas a frequências de modulação específicas do HCC versus selecionadas aleatoriamente. Observamos mudanças na expressão em um pequeno número de genes. Dois deles, a proteína proteolipe 2 (PLP2PLP2) e o ligante de quimiocinas (c motivo) 2 (XCL2), pareciam ser regulados com uma mudança de dobra absoluta maior que 1,8 nas células HepG2 expostas às frequências de modulação específicas do CHC. Usando reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR), validamos a regulação negativa desses dois genes não apenas nas células HepG2, mas também nas células Huh7.

Alguns estudos em glioblastoma e linhagens de células de melanoma demonstraram inibição proliferativa e interrupção do fuso mitótico após a exposição a campos elétricos alternados^,[43],[49]. Portanto, investigamos se as frequências de modulação específicas do tumor afetaram o fuso mitótico. Descobrimos que mais de 60% das células HepG2 expostas a frequências de modulação específicas do CHC tiveram interrupção pronunciada do fuso mitótico, enquanto nenhuma das células não expostas apresentou o mesmo fenótipo.

Conclusões sobre as conclusões

Em resumo, nossos resultados clínicos fornecem fortes evidências de que a administração intrabucal de amplitude de FCE modulada em frequências específicas do tumor é segura e bem tolerada e pode levar a respostas terapêuticas duradouras em pacientes com câncer avançado. Nossos experimentos in vitro demonstram que a proliferação de células cancerígenas pode ser direcionada usando frequências de modulação específicas do tumor, que foram identificadas em pacientes diagnosticados com câncer. As frequências de modulação específicas do tumor bloqueiam o crescimento de células cancerígenas, modificam a expressão gênica e interrompem o fuso mitótico (Figura 6). Estudos estão em andamento para dissecar o mecanismo biofísico que leva as células cancerígenas a responder a frequências de modulação específicas identificadas em pacientes com um diagnóstico correspondente de câncer, mas não para frequências selecionadas aleatoriamente ou específicas do tumor identificadas em outros tipos de tumores. A elaudiência deste mecanismo de ação é susceptível de revelar novos caminhos e alvos.

Notas de rodapé

Referências